? ? ? ? ??熒光定量PCR（realtime PCR）檢測，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行相對定量分析的方法。熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，由于該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，到21世紀(jì)初已得到廣泛應(yīng)用。

RT-qPCR包括三部分：

1、依靠逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)變成cDNA；

2、用PCR擴(kuò)增cDNA；

3、實時監(jiān)測和定量測定cDNA的量。

原理:

? ? ? ?RT-qPCR在單管PCR的擴(kuò)增和測定過程結(jié)合使用熒光指示染料。含量的測定依賴于測定增加的熒光信號，其強(qiáng)度與每一次PCR循環(huán)的產(chǎn)物量成正比。此外，在單次反應(yīng)中，用不同染料標(biāo)記的探針能夠監(jiān)測和定量多標(biāo)記的目的基因。在一次循環(huán)中，單次PCR熒光第一次超過既定的或背景熒光閾值，這個參數(shù)就是稱為循環(huán)閾值（Ct）或交叉點（Cp）。其實濃度越高，Ct值越小。當(dāng)維持PCR分析滴定終點敏感性和特異性時，這種熒光強(qiáng)度和擴(kuò)增的相關(guān)性使目的基因能夠在一個較大的范圍內(nèi)被精確定量。

qPCR擴(kuò)增曲線圖

技術(shù)路線：

1. 引物設(shè)計。

2. RNA提取及驗證。

3. RT-PCR。

4. qPCR實驗及跑膠驗證。

5. 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。

客戶需提供：

1. 靶基因信息。如：已知NCBI編號，基因名稱。

2. 細(xì)胞、組織、血液等待檢測樣本。

我們的服務(wù)：

1. 引物設(shè)計及合成服務(wù)。

2. RNA提取及驗證服務(wù)。

3. RT-qPCR實驗數(shù)據(jù)分析報告。