1.原理:
? ? ? ?將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體通過(guò)慢病毒包裝被感染到宿主細(xì)胞并整合到宿主染色體中,用載體中所含抗性基因進(jìn)行篩選。得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白,或者穩(wěn)定表達(dá)沉默特定基因的細(xì)胞株。
? ? ? ?shRNA細(xì)胞株構(gòu)建原理:短發(fā)卡RNA(shRNA)是可以克隆到表達(dá)載體并表達(dá)短的干擾RNA(sIrna,19-21個(gè)核苷酸的RNA雙鏈)的DNA分子。我們可根據(jù)靶標(biāo)設(shè)計(jì)短發(fā)卡RNA(shRNA)序列并將其克隆島特定載體上。短發(fā)夾RNA是設(shè)計(jì)為能夠形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的非編碼小RNA分子,可通過(guò)RNA干擾來(lái)抑制基因的表達(dá)。
過(guò)表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建原理:通過(guò)人工構(gòu)建的方式在目的基因上游加入調(diào)控元件,使基因可以在人為控制的條件下實(shí)現(xiàn)大量轉(zhuǎn)錄和翻譯,從而實(shí)現(xiàn)基因產(chǎn)物的過(guò)表達(dá)。
? ? ? ?KO細(xì)胞株構(gòu)建原理:基因敲除是自80年代末以來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型分子生物學(xué)技術(shù),是通過(guò)一定的途徑使機(jī)體特定的基因失活或缺失的技術(shù)。通常意義上的基因敲除主要是應(yīng)用DNA同源重組原理,用設(shè)計(jì)的同源片段替代靶基因片段,從而達(dá)到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術(shù)的發(fā)展,除了同源重組外,新的原理和技術(shù)也逐漸被應(yīng)用,比較成功的有基因的插入突變和iRNA,它們同樣可以達(dá)到基因敲除的目的。
2.技術(shù)應(yīng)用
? ? ? ? 需要長(zhǎng)期觀察外源基因表達(dá)的作用,進(jìn)行長(zhǎng)期藥理學(xué)研究、基因治療研究、遺傳調(diào)控機(jī)制研究或需要進(jìn)行大規(guī)模蛋白合成則需要構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株。
3.實(shí)驗(yàn)流程:
4.結(jié)果展示:
DU145細(xì)胞熒光圖? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? SW480細(xì)胞熒光圖
客戶提供:細(xì)胞株(凍存管/培養(yǎng)細(xì)胞),目的基因的質(zhì)粒/菌株,目的蛋白抗體,目的基因的載體信息、細(xì)胞培養(yǎng)信息
HYY提供:細(xì)胞株兩管凍存管或一瓶復(fù)蘇細(xì)胞,細(xì)胞株構(gòu)建報(bào)告,QPCR鑒定報(bào)告,WB鑒定報(bào)告?