1、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn):
?啟動(dòng)子與轉(zhuǎn)錄因子相互作用檢測(cè)
?轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構(gòu)、行使調(diào)控基因表達(dá)功能的蛋白質(zhì)分子,也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動(dòng)子中的特異順序結(jié)合,這些特異性的序列被稱為順式因子。轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式因子實(shí)現(xiàn)相互結(jié)合,從而對(duì)基因的表達(dá)起抑制或增強(qiáng)的作用。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)是檢測(cè)這類轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動(dòng)子中的特異順序結(jié)合的重要手段。
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技術(shù)流程:
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應(yīng)用領(lǐng)域:
潛在啟動(dòng)子/啟動(dòng)子核心區(qū)域檢測(cè);
潛在增強(qiáng)子/抑制子等調(diào)控子核心元件檢測(cè);
啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)檢測(cè);
啟動(dòng)子/增強(qiáng)子與轉(zhuǎn)錄因子的相互作用;
病毒/細(xì)胞相互作用;
藥物等化學(xué)誘導(dǎo)因素對(duì)啟動(dòng)子活性的調(diào)節(jié)(抑制或增強(qiáng));
射線等物理誘導(dǎo)因素對(duì)啟動(dòng)子活性的調(diào)節(jié)(抑制或增強(qiáng))。
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? ? ? ? miRNA與3’UTR相互作用檢測(cè)
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? ? ?? 可提供含有熒光素酶報(bào)告基因的人、大鼠、小鼠的3' UTR靶標(biāo)克隆,利用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)體外驗(yàn)證miRNA潛在靶基因。miRNAs 與靶基因的3' UTR區(qū)域特異結(jié)合后調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。當(dāng)3' UTR靶標(biāo)序列融合在一個(gè)熒光素酶報(bào)告基因下游并在體外表達(dá)時(shí),miRNA通過(guò)與下游3' UTR特異結(jié)合從而調(diào)節(jié)熒光素酶的表達(dá)。最后,通過(guò)分析熒光素酶的活性,間接了解miRNA的靶標(biāo)調(diào)控作用和特異性。
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2.?protein -protein互作
Co-IP(Co-Immunoprecipitation)基于抗體和抗原之間結(jié)合的專一性用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,是研究?jī)煞N蛋白在細(xì)胞內(nèi)的相互作用方法。
基本原理是:細(xì)胞在非變性條件下裂解,胞內(nèi)的蛋白通過(guò)抗體結(jié)合,以此為餌蛋白,免疫共沉淀調(diào)取與餌蛋白結(jié)合互作的靶標(biāo)蛋白,洗脫得到蛋白產(chǎn)物,用于WB檢測(cè)驗(yàn)證或MS(質(zhì)譜)分析
技術(shù)原理:
技術(shù)服務(wù)流程:
1.WB檢測(cè)餌蛋白的本底表達(dá)量(抗體特異性及效價(jià)檢測(cè),以及本底餌蛋白的表達(dá)量測(cè)定)
2.細(xì)胞裂解,獲取裂解液
3.免疫共沉淀結(jié)合互作蛋白
4.純化獲取結(jié)合蛋白
5.WB檢測(cè)或 MS分析
服務(wù)優(yōu)勢(shì):
1.可為客戶定制服務(wù),做融合表達(dá)(flag,tag,HA等),更加嚴(yán)謹(jǐn)驗(yàn)證與探索細(xì)胞內(nèi)生理狀態(tài)下的結(jié)合與互作,更具說(shuō)服力
2.設(shè)定不同組別,包括Input組,目的組,陰性組,實(shí)驗(yàn)嚴(yán)謹(jǐn)可靠
3.提供可直接用于文章的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果圖,以及實(shí)驗(yàn)原圖結(jié)果
4.提供完善的實(shí)驗(yàn)報(bào)告,更利于文章的撰寫和申請(qǐng)
適用研究:
1.細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合互作,形成復(fù)合物的調(diào)控模式
2.各種通路及代謝中,蛋白與蛋白的互作結(jié)合調(diào)控
客戶提供:
1.IP級(jí)別抗體(>30ug)及目的蛋白信息
2.活細(xì)胞:3-4*10^7
3.新鮮組織:組織量>0.3-0.5g
4.產(chǎn)物WB檢測(cè)的抗體(>5-10ug)
輝園苑提供:
1.所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖及原始圖片
2.完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告
3.可直接用于文章使用的處理結(jié)果圖
3. DNA/RNA-protein互作
1)ChIP實(shí)驗(yàn):
染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(Chromatin immunoprecipitation assay, ChIP):是一種研究體內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子與基因組DNA之間互作結(jié)合的方法。基本原理是活細(xì)胞狀態(tài)下,通過(guò)多聚甲醛固定,形成蛋白-DNA復(fù)合物,運(yùn)用超聲(或酶解)方法對(duì)染色體隨機(jī)剪切至一定長(zhǎng)度范圍,通過(guò)免疫共沉淀富集結(jié)合,純化獲取轉(zhuǎn)錄因子蛋白所結(jié)合的啟動(dòng)子區(qū)域片段,后續(xù)產(chǎn)物可用于Q-PCR檢測(cè)驗(yàn)證或測(cè)序分析。
技術(shù)原理:
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技術(shù)服務(wù)流程:
1.細(xì)胞交聯(lián)固定:多聚甲醛固定活細(xì)胞(或組織)
2.核質(zhì)分離:提取細(xì)胞核,獲取染色質(zhì)
3.超聲破碎:超聲斷裂染色質(zhì),獲取一定范圍長(zhǎng)度的片段
4.免疫共沉淀:獲取DNA與蛋白結(jié)合的特定復(fù)合物
5.解交聯(lián):解除DNA與蛋白的交聯(lián)狀態(tài),純化獲取DNA產(chǎn)物
6.Q-PCR檢測(cè)或建庫(kù)測(cè)序
服務(wù)優(yōu)勢(shì):
1.生物信息學(xué)方法,預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)錄因子蛋白結(jié)合的啟動(dòng)子基因,以及預(yù)測(cè)結(jié)合的特定motif,為客戶提供多選擇信息
2.直接尋找轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的編碼區(qū)上游靶基因,精準(zhǔn)定位調(diào)控基因
3.設(shè)置完整組別,包括Input組,陽(yáng)性組,對(duì)照組,陰性組,實(shí)驗(yàn)更加嚴(yán)謹(jǐn)可靠
4.提供可直接用于文章的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果圖,以及實(shí)驗(yàn)原圖結(jié)果
5.提供完善的實(shí)驗(yàn)報(bào)告,更利于文章的撰寫和申請(qǐng)
適用研究:
1.適用于人,大鼠,小鼠等哺乳動(dòng)物細(xì)胞的研究,探討與驗(yàn)證體內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子蛋白調(diào)控啟動(dòng)子的關(guān)系
2.適用于臨床各種組織樣品的探討研究,例:癌組織與癌旁組織,通過(guò)ChIP實(shí)驗(yàn)獲取得到的樣品產(chǎn)物DNA,建庫(kù)測(cè)序獲取調(diào)控的啟動(dòng)子基因
客戶提供:
1.IP或ChIP級(jí)抗體,抗體量>20ug
2.活細(xì)胞:1-2*10^7
3.新鮮組織:組織量>0.1-0.3g
4.驗(yàn)證基因信息
輝園苑提供:
1.WB檢測(cè)抗體效價(jià)與特異性結(jié)果圖
2.染色體斷裂圖
3.完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告
4.可直接用于文章使用的處理結(jié)果圖
2)RIP
RIP(RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀)實(shí)驗(yàn)技術(shù)是一種研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白的結(jié)合互作實(shí)驗(yàn)技術(shù),在表觀上研究的是轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控技術(shù)。基本原理是運(yùn)用靶蛋白的抗體,將蛋白與結(jié)合的RNA復(fù)合物調(diào)取獲得,后續(xù)純化得到RNA,用于Q-PCR檢測(cè)或高通量測(cè)序分析,驗(yàn)證預(yù)測(cè)結(jié)合的靶標(biāo)RNA或探索結(jié)合調(diào)控的標(biāo)志物RNA分子
技術(shù)原理:
技術(shù)服務(wù)流程:
1.細(xì)胞裂解,獲取裂解液
2.抗體與磁珠結(jié)合孵育,形成磁珠-抗體復(fù)合物
3.磁珠抗體復(fù)合物與裂解液孵育結(jié)合,捕獲蛋白結(jié)合的RNA
4.純化獲取得到產(chǎn)物RNA
5.Q-PCR檢測(cè)驗(yàn)證或高通量測(cè)序篩選靶標(biāo)分子
服務(wù)優(yōu)勢(shì):
1.生物信息學(xué)預(yù)測(cè)蛋白結(jié)合的序列,對(duì)蛋白結(jié)合互作的RNA分子進(jìn)行檢測(cè)和驗(yàn)證,可為客戶提供深度研究,探討RBP結(jié)合的RNA motif
2.設(shè)置完整組別,包括Input組,陽(yáng)性組,對(duì)照組,陰性組,實(shí)驗(yàn)更加嚴(yán)謹(jǐn)可靠
3.提供可直接用于文章的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果圖,以及實(shí)驗(yàn)原圖結(jié)果
4.提供完善的實(shí)驗(yàn)報(bào)告,更利于文章的撰寫和申請(qǐng)
適用研究:
1.適用于人,大鼠,小鼠等哺乳動(dòng)物的研究,探討與驗(yàn)證體內(nèi)蛋白與RNA結(jié)合互作轉(zhuǎn)錄后調(diào)控研究
2.適用于各種RNA的研究,如:mRNA,LncRNA,miRNA,circle RNA等
3.適用于臨床各種組織標(biāo)本的探討研究,例:癌組織與癌旁組織,通過(guò)RIP(AG02)實(shí)驗(yàn)獲取得到的樣品產(chǎn)物RNA,高通量測(cè)序,篩選靶標(biāo)分子或分子標(biāo)志物
客戶提供:
1.IP或ChIP級(jí)抗體,抗體量>20ug
2.活細(xì)胞:8-9*10^7
3.新鮮組織:組織量>1-3g
4.驗(yàn)證基因信息
輝園苑提供:
1.WB檢測(cè)抗體效價(jià)與特異性結(jié)果圖
2.完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告
3.可直接用于文章使用的處理結(jié)果圖
3)RNA pull down?
RNA pull down 是一種研究RNA與蛋白結(jié)合互作的實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法,生物體內(nèi)許多功能的核心是RNA與蛋白的結(jié)合來(lái)進(jìn)行調(diào)控,如:蛋白的合成,mRNA的組裝,細(xì)胞發(fā)育調(diào)控等。基本原理是:通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄獲取標(biāo)記的RNA作為探針,與細(xì)胞細(xì)胞裂解液孵育,免疫共沉淀的方法獲取RNA結(jié)合捕獲的蛋白,后續(xù)可通過(guò)WB檢測(cè)驗(yàn)證結(jié)合蛋白,或通過(guò)質(zhì)譜(MS)的方法得到結(jié)合蛋白的信息
技術(shù)原理:
技術(shù)服務(wù)流程:
1.克隆載體的構(gòu)建
2.體外轉(zhuǎn)錄形成標(biāo)記的RNA探針
3.探針與裂解液孵育結(jié)合,形成磁珠-RNA-蛋白復(fù)合物
4.純化獲取蛋白產(chǎn)物
5.WB檢測(cè)或MS分析
服務(wù)優(yōu)勢(shì):
1.生物信息學(xué)預(yù)測(cè),分析RNA motif與蛋白的結(jié)合,可通過(guò)截?cái)嗯c截短的方式研究結(jié)合的序列信息,為客戶提供深度分析和研究方案
2.設(shè)置完整組別,包括Input組,正義鏈組,反義鏈組,陰性組,實(shí)驗(yàn)更加嚴(yán)謹(jǐn)可靠
3.提供可直接用于文章的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果圖,以及實(shí)驗(yàn)原圖結(jié)果
4.提供完善的實(shí)驗(yàn)報(bào)告,更利于文章的撰寫和申請(qǐng)
適用研究:
各種通路,代謝路徑,分子機(jī)制,細(xì)胞調(diào)控,藥物誘導(dǎo)等方向的調(diào)控研究,尋找或驗(yàn)證RNA結(jié)合的蛋白,如:結(jié)合蛋白為某些轉(zhuǎn)錄因子,代謝過(guò)程中的核心酶,通路中的調(diào)控蛋白等
客戶提供:
1.基因信息及轉(zhuǎn)錄本信息(或含目的基因的載體)
2.活細(xì)胞:3-4*10^7
3.新鮮組織:組織量>0.3-0.5g
4.產(chǎn)物WB檢測(cè)的抗體(>5-10ug)
輝園苑提供:
1.體外轉(zhuǎn)錄檢測(cè)圖,產(chǎn)物銀染膠圖
2.完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告
3.可直接用于文章使用的處理結(jié)果圖